Grynos kultūros ir jų saugojimas

http://www.biosafety-cabinets.com/2016/06/microbial-pure-culture.html

Tyrimams imamuose mėginiuose, pavyzdžiui, šlapimo, pūlių, vandens, dirvos ar maisto, randama ne viena rūšis bakterijų. Šiuos mėginius užpylus ant kietos terpės, susiformuos juose esančių mikroorganizmų kolonijos. Yra manoma, kad naudojant standartinius kultivavimo metodus, tik 1% visų ekosistemoje esančių bakterijų suformuoja kolonijas. Teoriškai, plika akimi matoma kolonija atsiranda iš vienos sporos ar vegetatyvinės ląstelės. Taip pat koloniją gali suformuoti ir daugiau to paties mikroorganizmo ląstelių, susijungusių viena su kita į grupes ar grandinėles. Mikrobinės kolonijos dažniausiai turi savitą išvaizdą, kuri leidžia atskirti vienos rūšies mikroorganizmus nuo kitų. Kad lėkštelėje pamatytumėme atskiras mikroorganizmų kolonijas, mėginys turi būti gerai paskirstytas per visą jos plotą. Lėkštelėje užaugs keleto ar net keliolikos skirtingų rūšių kolonijos.

https://sciencebrewer.wordpress.com/tag/bacteria/

Tačiau didžiajai daliai mikrobiologinių tyrimų reikia grynų bakterijų kultūrų, todėl vienas kolonijas reikia atskirti nuo kitų. Dažniausiai naudojamas metodas, kuriuo galima išskirti grynas kultūras, yra štrichavimas (mikrobiologinis klonavimas). Jis atliekamas taip: sterilia inokuliavimo kilpele yra paimama šiek tiek negrynos kultūros, kurioje yra daugiau nei viena bakterijų rūšis, ir su ja yra štrichuojama ant mitybinės terpės paviršiaus. Štrichuojama ne bet kaip, o tam tikrais raštais. Kol yra piešiamas raštas, bakterijos nuo kilpelės perkeliamos ant mitybinės terpės – bakterijų ląstelės atskiedžiamos ant terpės paviršiaus. Paskutinės nuo kilpelės perkeltos ląstelės bus pakankamai atitolusios nuo kitų ir iš jų išaugs atskiros kolinijos. Atskirtą koloniją galima perkelti (su inokuliavimo kilpele) į mėgintuvėlį su mitybine terpe. Mėgintuvėlis yra inkubuojamas bakterijoms tinkamose sąlygose. Jame augs gryna bakterijų kultūra ir bus galima atlikti reikiamus tyrimus.

http://youresumes.com/plate-method-related-keywords-bacteria-streak-plate-method-long-

https://www.boundless.com/microbiology/textbooks/boundless-microbiology-textbook/culturing-microorganisms-6/culturing-bacteria-58/aseptic-technique-dilution-streaking-and-spread-plates-367-7652/

Bakterijų kolonijų išskyrimas štrichavimo metodu yra tinkamas tada, kai, palyginus su visa mėginyje esančia populiacija, yra didelis norimų išskirti mikroorganizmų skaičius. Tačiau, jei ląstelių skaičius yra nedidelis, pirmiausia atliekami jau aptarti selektyvūs metodai, o tada jau galima išsigryninti reikiamas kultūras.

https://microbeonline.com/streak-plate-method-principle-purpose-procedure-results/

Bakterinių kultūrų saugojimas

https://www.shutterstock.com/video/search/petri-dish-isolated

Kai mikrobiologiniai tyrimai atliekami ilgesnį laiką ar jau turimas kultūras norima išlaikyti ilgesniam laikui, turi būti sustabdytas aktyvus jų augimas. Trumpalaikiam (1-3 mėn.) bakterinių kultūrų saugojimui tinka šaldytuvai (4-10°C). Tokioje temperatūroje didžiosios dalies laboratorijose naudojamų bakterijų metabolizmas sulėtėja, jos nesidaugina arba dauginasi lėčiau, todėl laikomos kultūros nesensta. Ilgesniam bakterijų saugojimui naudojami du pagrindiniai metodai: bakterijų užšaldymas (deep-freezing) ir liofilizacija. Prieš abu šiuos metodus yra pagaminama turimos kultūros suspensija (bakterijos skystyje).

Užšaldymas – bakterijų suspensija greitai užšaldoma itin žemoje temperatūroje, kuri gali būti nuo -50°C iki -95°C. Taip užšaldyta kultūra gali būti atšildyta ir kultivuojama net po kelerių metų. 

Liofilizacijos (šaldymo-džiovinimo) metu mikrobų suspensija yra greitai užšaldoma temperatūrose, svyruojančiose nuo -54°C iki -72°C. Užšaldytas mėginys yra išdžiovinamas naudojant vakuumą, mėginyje esantis vanduo išgaruoja (sublimacija). Likusios, pudros pavidalo, nuosėdos, kuriose yra mikrobai, gali būti laikomos metų metus. Organizmus galima atgaivinami bet kuriuo metu, juos patalpinus į tinkamą skystą terpę ir sąlygas.

http://www.nextar.co.il/Article-57,1343-Lyophilization-Development.aspx

Sekit ir dalinkitės. Nauji įrašai kiekvieną pirmadienį, trečiadienį ir penktadienį. Iki kito susitikimo :)

chekas

Informacijos šaltiniai:

• Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case. “Microbiology. An Introduction”. 11th edition. p. 167-168